一.原位杂交天1.重新水化和固定1）吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分钟。2）置换成30％的PBST溶液，放置5分钟3）置换成PBST溶液，原位杂交，放置5分钟，重复一次4）置换成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟5）用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）1）用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。2）用PBST溶液轻洗，在PBST中放置5分钟。3）用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟，室温。4）用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。原位杂交第三天1）用1ml含10％热灭清的MABT溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，荧光原位杂交，然后用1mlMABT置换，25分钟，再用1mlMABT溶液置换，一小时以上，后用1mlMABT溶液置换，25分钟。2）用1ml1mM左旋米睉的Stainingbuffer洗三次，每次放置五分钟。3）将胚胎转入十六孔板中，吸去stainingbuffer，加上300ulBMPurpleAPSubstrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，染色体荧光原位杂交，十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗两三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。6）4C冰箱保存。植物组织原位杂交的步骤包括以下几个方面：1.制备组织样品：从植物中取出需要研究的组织样品，如根、茎、叶等。2.固定组织样品：将组织样品固定在载玻片上，通常使用或乙醇等化学物质进行固定。3.处理组织样品：对固定的组织样品进行脱水、透明化、脱脂等处理，以便于DNA探针的穿透和结合。4.制备DNA探针：根据需要研究的基因序列，设计并合成DNA探针。DNA探针可以标记荧光染料或性同位素，以便于检测。5.杂交DNA探针：将DNA探针与组织样品进行杂交，通常需要在高温下进行，以便于DNA探针与RNA或DNA结合。6.检测杂交信号：通过荧光显微镜或计数器等设备，检测DNA探针与RNA或DNA的结合情况，确定目标基因的表达模式和位置。染色体荧光原位杂交-原位杂交-武汉贝科新肽(查看)由武汉贝科新肽科技有限公司提供。行路致远，砥砺前行。武汉贝科新肽科技有限公司致力成为与您共赢、共生、共同前行的战略伙伴，更矢志成为化学试剂具有竞争力的企业，与您一起飞跃，共同成功!)