植物染色体原位杂交检测技术服务-科锐诺生物科技(图)
PCR技术是一种在生物体细胞外通过酶促合成特异DNA或DNA片段的方法。其原理是设计特异引物,在TaqDNA聚合酶催化作用下,经过高温变性、低温退火和适温延伸3个步骤反复循环,对某一特定模板的特定区域进行扩增,反应结束后应用凝胶电泳或测序等方法分析产物。因此,该技术可以直接检测疾病组织、细胞中是否存在某种病毒DNA,同时PCR技术还是基因突变检测的前期必备技术。点对点酵母双杂交验证实验流程1、诱饵蛋白毒性及自激1活检测;2、共转化:分别将诱饵/捕获质粒(pGBKT7-Bait/pGADT7-Prey)、阳性对照质粒(pGBKT7-p53/pGADT7-T)、阴性对照质粒(pGBKT7-Lam/pGADT7-T)分别共转到Y2HGold感受态细胞中,涂布于DDO平板培养;3、点板验证:分别从平板上挑单克1隆稀释10倍、100倍、1000倍,植物染色体原位杂交检测技术服务,然后点板到TDO/X/A和QDO/X/A固体培养基进行验证;4、实验数据与报告整理。原位杂交天1.重新水化和固定1)吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分钟。2)置换成30%的PBST溶液,放置5分钟3)置换成PBST溶液,放置5分钟,重复一次4)置换成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟5)用PBST洗两次,每次放置五分钟,室温。蛋白酶处理与后固定(本实验不做此步)1)用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理,5体节到24小时的胚胎处理3分钟,24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶处理,发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织,以便于杂交。2)用PBST溶液轻洗,在PBST中放置5分钟。3)用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟,室温。4)用PBST洗两次,每次放置五分钟,室温。2.预杂交1)每个管中置换成大约300ulHYB-溶液,60℃水浴5分钟,避免振荡。2)用等体积的HYB+取代HYB-。3)60℃水浴,预杂交4小时以上。3.杂交1)吸去预杂交的HYB+,加上100ul已加入探针的HYB+溶液(探针浓度约为1ng/ul)..2)60℃温浴过夜。注:杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等,温度越低,探针结合越好,温度越高,背景越小。植物染色体原位杂交检测技术服务-科锐诺生物科技(图)由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。武汉科锐诺生物科技有限公司拥有很好的服务与产品,不断地受到新老用户及业内人士的肯定和信任。我们公司是商盟认证会员,点击页面的商盟客服图标,可以直接与我们客服人员对话,愿我们今后的合作愉快!)
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